NFkappaB CALUX® (BDS 018)
NFkappaB応答性CALUX®は、NFkappaB経路を活性化するリガンドの存在をレポーター遺伝子としてNFkappaB応答性要素（NFkappaB REs）に結合したホタルルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだヒト骨肉腫細胞株U2OSを使用しています。これらの化合物によってNFkappaB経路が活性化されると、NFkappaBがNFkappaB REsに結合します。これにより、通常はNFkappaB REs媒介の転写に関連するタンパク質が発現し、ルシフェラーゼも発現します。適切な基質をルシフェラーゼに追加すると、光が放出されます。生成される光の量はリガンド特異的経路活性化の量に比例しており、関連する参照化合物である経路アゴニスト、インターロイキン-1または12-O-テトラデカノイルホルボール13-アセタート（TPA）に対してベンチマークされ、毒性等価（TEQ）またはバイオアナリティカル等価（BEQ）として表現されます。
| 仕様 | NFkappaB CALUX® |
| 基底細胞株 | U2OS |
| 種 | ヒト |
| 組織 | 骨肉腫 |
| 陽性対照 | インターロイキン‑1または12‑O‑テトラデカノイルホルボール13‑酢酸塩（TPA） |
| エンドポイント（純粋化合物） | ECまたはPC濃度、最小効果濃度（例：PC10） |
| エンドポイント（混合物） | 毒性当量（pg TEQ/g処理サンプル） |
| テスト期間 | 24時間（インキュベーション時間） |
| 特異性 | NFkappaB経路のみを活性化します。リガンドの選択は、化合物クラス選択的検査法および/または代謝モジュールを通じて行うことができます。 |
| アッセイ干渉 | 非常に経路特異性の高いコンストラクトと特異的な受容体コンストラクト、および広範なQA/QCを使用しているため、最小限です。特定のリガンドで稀に発生する細胞毒性および非特異的ルシフェラーゼ干渉は、cytotox CALUX®アッセイで評価できます。 |
| 感度（LOD/Q） | 通常、高pgの範囲（マトリックスとサンプルサイズに依存） |
| 変動制 | …………… |
| Z係数 | …………… |
| マトリックス | あらゆるタイプのサンプル |
| サンプルの体積/質量 | マトリックスおよび所望の（定量限界）LOQに依存 |
| 化合物の量 | 通常は10mg。DMSOで提供される高効力化合物の場合はそれよりずっと低い。 |
| 評価基準 | 関連するアプリケーション/規制に準拠した社内方式。 |
| SOPとガイドライン | BDS内部、ERおよびAR CALUX®アッセイに類似 |
| HTSプロトコル | BDS; EURL‑ECVAM DB‑ALMプロトコル番号197を参照: 自動CALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順 |
| 主な参考文献 | Piersma AH, Schulpen SHW, Uibel F, Van Vugt-Lussenburg, B, Bosgra S, Hermsen SAB, Roelofs MJE, Man, H., Jonker, L., Van der Linden, S, Van Duursen MBM, Wolterbeek APM, Schwarz M, Kroese ED, Van der Burg B. (2013) Evaluation of an alternative in vitro test battery for detecting reproductive toxicants. Reprod. Toxicol. 38,53-64. |