DR CALUX® (BDS 001)
ダイオキシン応答性（DR）CALUX®は、ダイオキシン（PCDDs）およびダイオキシン様化合物（フラン類（PCDFs）やダイオキシン様PCB（dl-PCBs）など）の存在を検出するためのレポーター遺伝子として、ダイオキシン応答要素（DREs）と結合したホタルルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだラット肝細胞株H4IIEで構成されています。これらの化合物が細胞内のアリール炭化水素受容体（AhR）に結合すると、リガンド-受容体複合体がDREに結合します。これにより、通常DREを介した転写に関連するタンパク質の発現が引き起こされますが、同時にルシフェラーゼも発現します。ルシフェラーゼの適切な基質を添加すると、光が放出されます。生成された光の量は、リガンド特異的受容体活性化の量に比例し、関連する標準化合物2,3,7,8-TCDDと比較され、毒性当量（TEQ）または生物分析当量（BEQ）として表されます。
| 仕様 | DR CALUX® |
| 基底細胞株 | H4IIE |
| 種 | ラット |
| 組織 | 肝細胞癌 |
| 陽性対照 | 2,3,7,8‑TCDD |
| エンドポイント（純粋化合物） | ECまたはPC濃度、最小効果濃度（例：PC10） |
| エンドポイント（混合物） | 毒性当量（pg TEQ/g処理サンプル） |
| テスト期間 | 24時間（インキュベーション時間） |
| 特異性 | 選択的硫酸処理法によって、通常は非常に安定したダイオキシン様化合物のみがAhR に結合します。リガンドの選択は、化合物クラスの選択的処理法および/または代謝モジュールによって行うことができます。 |
| アッセイ干渉 | 非常に経路特異性の高い構成と広範なQA/QCを使用しているため、最小限です。 さらに、混合物中のダイオキシンTEQ評価では、サンプルを硫酸処理で浄化し、その後、dl‑PCBをPCDD/Fから分離する追加手順を実行します。細胞毒性はチェックされますが、まれにしか発生しません。偽陽性/偽陰性の場合は、比較するためのガイドレベルを確立する必要があります (例: EC/644/2017の5%未満の偽準拠率が受け入れられます)。 |
| 感度（LOD/Q） | 通常、pgの範囲（マトリックスとサンプルサイズに依存） |
| 変動制 | …………… |
| Z係数 | …………… |
| マトリックス | あらゆるタイプのサンプル |
| サンプルの体積/質量 | マトリックスおよび所望の（定量限界）LOQに依存 |
| 化合物の量 | 通常は10mg。DMSOで提供される高効力化合物の場合はそれよりずっと低くなります。 |
| 評価基準 | 関連するアプリケーション/規制に準拠した社内方式。 |
| SOPとガイドライン | BDS内部およびEC 委員会規則(EU)No 644/2017、委員会規則(EU)No 771/2017、NL‑SPECIE‑07(オランダ、Rijkswaterstaat)、EPA‑4435 (米国)、JISガイドライン463(日本)、 未利用堆積物の危険破壊防止のためのガイドライン(TA‑2085/2005) (ノルウェー)およびEURL‑ECVAM法DB‑ALMプロトコル番号197.: 自動化されたCALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順。 |
| HTSプロトコル | BDS; EURL‑ECVAM DB‑ALMプロトコル番号197を参照: 自動CALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順 |
| 主な参考文献 | Garrison PM, Tullis K, Aarts JM, Brouwer A, Giesy JP, Denison MS (1996) Species-specific recombinant cell lines as bioassay systems for the detection of 2,3,7,8-etrachlorodibenzo-p-dioxin-like chemicals. Fundam Appl Toxicol. 30:194-203. Van Vugt-Lussenburg et al. 2013 DR CALUX®: A high-throughput screening assay for the detection of dioxin and dioxin-like compounds in food and feed. In “Highthroughput screening methods in toxicity testing” (P. Steinberg, ed). John Wiley and Sons, Inc.New York. ISBN 9781118065631 |